Guillaume Depardieu est le fils des comédiens Gérard Depardieu et Elisabeth Depardieu.

Il se familiarise dès l'enfance avec le milieu du cinéma. Son père l'emmène parfois sur les plateaux de tournage : il est ainsi figurant dans Pas si méchant que ça (1974), Jean de Florette (1986) ou encore Cyrano de Bergerac (1990).

Mais c'est à Alain Corneau qu'il doit son premier grand rôle avec Tous les mat...